產(chǎn)品分類PRODUCT CLASSIFICATION
推薦產(chǎn)品Recommended products
01 研究背景
1.1 脂質(zhì)體
脂質(zhì)體是一種微型泡囊體,能將藥物包封于脂質(zhì)雙分子層內(nèi),具有靶向、緩釋、降低藥物毒性等諸多優(yōu)點(diǎn),迄今已經(jīng)在制藥、醫(yī)療、生物化學(xué)、食品科學(xué)、化妝品等多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。評(píng)價(jià)脂質(zhì)體質(zhì)量的指標(biāo)有外觀、粒徑分布和包封率等,制備方法不同,脂質(zhì)體的粒徑、結(jié)構(gòu)都不盡相同。脂質(zhì)體在不同領(lǐng)域應(yīng)用,粒徑是衡量脂質(zhì)體內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo),探頭式超聲由于操作簡(jiǎn)便,已成為制備脂質(zhì)體主要制備方法之一,但是由于超聲條件的不同,制備的脂質(zhì)體沒有很好的重現(xiàn)性。影響超聲效果因素包括輸入功率、作用時(shí)間、超聲頻率等,通過控制這些因素,可以控制脂質(zhì)體粒徑的變化,從而得到理想大小的脂質(zhì)體。
02 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 脂質(zhì)體的制備
采用逆向蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體,精密稱取一定量的卵磷脂、膽固醇、α-生育酚適量混合溶于一定量氯仿中,將脂質(zhì)溶液移入250mL圓底瓶中,氮?dú)庵?5℃恒溫水浴減壓去除有機(jī)溶劑,直至形成干燥脂質(zhì)薄膜,待有機(jī)溶劑去除,停止旋轉(zhuǎn),從水浴中提起圓底瓶,加入一定濃度的PBS(pH6.5)溶液旋轉(zhuǎn)洗膜,在45℃水浴中水合2h即形成乳白色脂質(zhì)體混懸液。
2.2 脂質(zhì)體溶液的超聲方法
圖1為本實(shí)驗(yàn)所用超聲裝置,鈦探針直徑為1.5cm,反應(yīng)池為一個(gè)開放的玻璃燒杯(直徑3cm,高度7.5cm),冰水浴超聲。實(shí)驗(yàn)設(shè)置20%、30%和40%三個(gè)功率百分比,超聲處理脂質(zhì)體,超聲儀探針距杯底深度分別設(shè)置為1.5和3.0cm。15ml脂質(zhì)體按上述條件針式冰水浴超聲,超聲5次,每次時(shí)間為4mim(單次超聲30s,間隔30s)。超聲完成后,關(guān)閉超聲使容器冷卻,用0.22μm微孔濾膜過濾除去鈦顆粒雜質(zhì)。激光粒度儀分析超聲對(duì)脂質(zhì)體粒徑分布及對(duì)分散系數(shù)的影響。
圖1
a:鈦探針(直徑1.50cm);b:燒杯(直徑3cm,高7.5cm);
c:大燒杯(直徑7cm,高90cm);d:脂質(zhì)體混懸液;
e:冰水?。?/span>x:探針與燒杯底部距離
03 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 超聲功率對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響
不同輸入功率,超聲時(shí)間為20min,脂質(zhì)體超聲后平均粒徑及粒徑范圍分布見附表。結(jié)果表明,隨著超聲功率的增加,脂質(zhì)體粒徑變小,粒徑分布范圍變窄,說明高功率超聲得到的脂質(zhì)體粒徑更均勻。圖2為磷脂含量為10mmol/L脂質(zhì)體超聲前后粒徑圖,超聲之前(圖2A)脂質(zhì)體粒徑呈單峰分布,平均粒徑為300nm左右,隨著超聲時(shí)間的增加,超聲20min后能明顯觀察到粒徑變小,粒徑分布變窄,見圖2B,超聲功率為40%時(shí),20min后獲得粒徑約為70nm左右的單峰分布的脂質(zhì)體。
附表 超聲輸入功率對(duì)脂質(zhì)體粒徑及粒徑分布影響
B
A:超聲前脂質(zhì)體粒徑分布圖;B:超聲20min后脂質(zhì)體粒徑分布圖,輸入功率40%;超聲時(shí)間20min;磷脂含量10mmol/L
3.2 超聲時(shí)間對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響
如圖3所示,超聲功率分別為20%、25%、30%、35%、40%,增加超聲時(shí)間,磷脂含量為10mmol/L的脂質(zhì)體粒徑變化,結(jié)果顯示,隨著超聲時(shí)間的增加,脂質(zhì)體粒徑減小,直到20min時(shí)得到一個(gè)穩(wěn)定的脂質(zhì)體粒徑,不再發(fā)生變化。為了證實(shí)超聲時(shí)間足夠形成穩(wěn)定的脂質(zhì)體粒徑,增加超聲時(shí)間到25min,考察脂質(zhì)體的粒徑分布。
圖3
3.3 超聲時(shí)間對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響
設(shè)定中高低三個(gè)超聲輸入功率20%、30%和40%,燒杯底部和探頭的距離分別為10和15mm。在不同的超聲功率和深度下,超聲時(shí)間不同,得到不同粒徑的脂質(zhì)體。圖4顯示的是磷脂含量為10mmol/L的脂質(zhì)體,應(yīng)用超聲功率分別為20%、30%和40%,粒徑隨超聲時(shí)間的變化圖,結(jié)果表明,隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng),脂質(zhì)體粒徑降低,直到超聲時(shí)間為20min,脂質(zhì)體粒徑不在變化,從圖中還可以看出,隨著超聲功率的增加,脂質(zhì)體粒徑降低。應(yīng)用不同的超聲時(shí)間和不同的深度,獲得的脂質(zhì)體粒徑也不同??紤]到連續(xù)的超聲時(shí)間和功率,深度為15mm時(shí),獲得的脂質(zhì)體粒徑更佳。15mm與10mm探針深度獲得的脂質(zhì)體粒徑并沒有明顯區(qū)別,然而在10mm時(shí),脂質(zhì)體空化現(xiàn)象更為明顯,促進(jìn)羥基自由基的形成,造成脂質(zhì)體成分中磷脂的氧化。15mm深度時(shí)磷脂發(fā)生氧化的機(jī)率更低。這點(diǎn)在應(yīng)用不飽和磷脂制備脂質(zhì)體時(shí)尤其重要,因?yàn)椴伙柡土字菀籽趸?。從圖中可以看出,功率越高,超聲得到的脂質(zhì)體分散系分散得越均勻,隨著功率的增加,粒徑和分散率降低,但超聲時(shí)間過長(zhǎng),超聲探頭會(huì)釋放更多鈦顆粒雜質(zhì),造成污染。因此,超聲條件為探針深度為15mm、超聲功率為40%,超聲時(shí)間為20min時(shí),得到的脂質(zhì)體粒徑和分散度最好。
A:磷脂含量為10mmol/L,超聲功率分別為20%、30%和40%時(shí)粒徑及分散性隨超聲時(shí)間的變化(探頭深度10mm)
B:磷脂含量為10mmol/L,超聲功率分別為20%、30%和40%時(shí)粒徑及分散性隨超聲時(shí)間的變化(探頭深度15mm)
04 討論
4.1 新芝生物·全球樣品制備專家
超聲波是由一系列疏密相間的縱波構(gòu)成的,并通過液體介質(zhì)向四周傳播。通過研究脂質(zhì)體制備過程中超聲對(duì)其影響,來達(dá)到控制脂質(zhì)體性質(zhì)的目的,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,影響脂質(zhì)體粒徑分布范圍和zeta電位的三個(gè)超聲參數(shù)分別為:超聲深度、功率輸入和超聲時(shí)間。因此,為獲得的均一性較好的脂質(zhì)體應(yīng)該從此三方面進(jìn)行探索。
新芝生物作為全球樣品制備專家,深耕超聲技術(shù)多年,產(chǎn)品功能齊全,超聲產(chǎn)品具有功率調(diào)控、時(shí)間調(diào)控和超聲深度調(diào)控等多方面功能。從用戶實(shí)際需求出發(fā),能夠?yàn)橛脩籼峁└咝省⒏咝詢r(jià)比的產(chǎn)品和解決方案。